CUESTIONARIO
1.- ¿CUAL
ES EL PROPÓSITO GENERAL DE ESTE LABORATORIO VIRTUAL?
El propósito del laboratorio es familiarizarte
con la ciencia y las técnicas utilizadas para identificar diferentes tipos de
bacterias basadas en su secuencia de ADN. No hace mucho tiempo, la
secuenciación del ADN era un proceso tedioso y que consumía mucho tiempo. Con
equipos y kits comerciales fácilmente disponibles, ahora es una rutina. Las
técnicas utilizadas en este laboratorio son aplicables en una amplia variedad
de entornos, incluyendo la investigación científica y laboratorios forenses.
2.- ¿CUALES
SON LOS 4 PASOS BÁSICOS INVOLUCRADOS EN ESTE LABORATORIO DE IDENTIFICACIÓN
BACTERIANA?
·
Preparar una muestra de
un paciente y aislar el ADN bacteriano completo.
·
Hacer muchas copias de
la pieza de ADN deseado.
·
Secuencia del ADN.
·
Analizar la secuencia e
identificar las bacterias.
3.- ¿QUE
ES “16S R DNA”, Y COMO SE UTILIZA PARA IDENTIFICAR ESPECIES DE BACTERIAS?
El fragmento de ADN utilizado para identificar
las bacterias es la región que codifica una pequeña subunidad del ARN
ribosómico (16S rRNA). Nos referiremos a esta pieza como 16S rDNA. Diferentes
especies bacterianas tienen secuencias únicas de 16S rDNA.
La identificación se basa en la coincidencia de la secuencia de su muestra con una base de datos de todas las secuencias conocidas 16S rDNA.
La identificación se basa en la coincidencia de la secuencia de su muestra con una base de datos de todas las secuencias conocidas 16S rDNA.
4.-
COMO TÉCNICA DE LABORATORIO DE PATOLOGÍA, ¿CUAL ES SU TAREA EN ESTE LABORATORIO
VIRTUAL?
Identificar
una muestra bacteriana recibida de un médico.
5.- ¿LA
EXTRACCIÓN DE DNA QUE PASO INICIAL IMPLICA?
El
proceso de extracción de ADN bacteriano consiste en disolver la pared celular
con un tampón digestivo (en la botella con tapa blanca) disponible como un kit
comercial. El tampón contiene enzimas proteolíticas que "comen" la
pared celular. Este paso puede durar varias horas.
10.-
A) ¿QUE ES PELLET CELULAR?
Son
los restos de la bacteria en la parte inferior del tubo; es el producto del
paso Nº 1
Deposito
solido de desechos celulares luego de la centrifugación
B) ¿QUE ES EL SOBRENADANTE?
Es
un líquido sobre el cual flota el DNA
C) ¿DONDE ESTA EL DNA?
El ADN está contenido en el SOBRENADANTE que se transfiere a continuación al tubo del PCR
11.-
¿QUE SIGNIFICA PCR Y CUAL ES EL PROPÓSITO DEL PCR?
PCR (Polymerase Chain Reaction) es una técnica
que permite realizar muchas copias de ADN. Es una de las piedras angulares de
la revolución actual en genética molecular. Antes del advenimiento de la PCR,
hacer suficientes copias de ADN para la secuenciación era un proceso tedioso.
Ahora, la PCR hace que la obtención de copias de ADN de una pequeña muestra
original de la rutina, con consecuencias de gran alcance. Por ejemplo, utilizó
no sólo la ciencia forense para identificar sospechosos potenciales, sino
también para que los biólogos de conducta los rastreen paternidades en una
población de aves silvestres para vigilar qué tipo de comportamiento conduce al
éxito en el apareamiento.
13.- ¿QUE CONTIENE EL MASTER
MIX?
Llamada también solución
maestra y contiene:
- Agua
- Un
tampón para mantener la mezcla al pH correcto para la reacción de PCR
- Grandes
cantidades de los cuatro nucleótidos adenina,
citosina, guanina y timina
- Grandes
cantidades de Primers de ADN de oligonucleótidos que se unen a la región
16s rDNA para iniciar el proceso de replicación
- Y
un ADN polimerasa termoestable que extiende la cadena de ADN de la copia.
14.-
¿QUE SON PRIMERS? ¿POR QUE SE AGREGA UNA CARTILLA?
Llamados también "iniciadores”
Los Primers son pequeños fragmentos de ADN que se unen a secuencias específicas; en este caso, secuencias dentro del gen 16S
rRNA. En este laboratorio, los dos Primers utilizados, 27F y 1525R, se unen
a extremos opuestos del gen, uno en cada
hebra de ADN. Una vez que los Primers se unen, el ADN polimerasa extiende
el ADN desde el extremo 5 'hasta el extremo 3'. Los Primers se seleccionan de
modo que, a medida que se hacen las dos nuevas copias, se superponen en la región
de interés.
Estos Primers son "universales", lo
que significa que se unen y por lo tanto copian el gen 16S rRNA de cualquier
especie bacteriana (excepto tal vez para las más inusuales). Esto se debe a que
las secuencias a las que se unen los Primers son extremadamente similares entre
todas las especies bacterianas.
24.-
¿DESPUÉS DE 8 CICLOS, CUANTAS COPIAS DEL ADN DESEADO SE HAN SINTETIZADO?
240
copias
25.- ¿DESPUÉS DE 30 CICLOS?
1073741764
de copias
